当我们在养细胞的时候，有可能会出现如下的状况：
细胞生长缓慢
细胞变形
碎片增加
悬浮细胞容易成团
培养基提前变色
镜下发现有小黑点
如果排除了其他试剂选择不当、细胞株老化、细菌污染……原因，而仍有上述一种或几种情况，则高度提示：细胞可能出现了支原体污染。
据报道，细胞培养中发生支原体污染的机率较高，会达到70%左右，常规抗生素的使用对支原体几乎无效。
那么，支原体污染，对细胞培养有什么危害呢？
支原体污染的危害
1. 细胞状态不佳，生长速度慢，实验无法推进
2. 细胞内DNA、RNA及蛋白表达发生改变，影响实验结果，导致实验数据不准确，时间、经费的浪费
3. 一株污染的细胞成为实验室的污染源，对工作区域以及培养箱和液氮罐造成污染，进而污染其他细胞，导致其他细胞继发性污染，实验受影响，数据无法重复，预期结果出不来
图：支原体给细胞带来的诸多影响
图：一管细胞的污染可影响到其他细胞
那么，怎样明确细胞是否有支原体污染呢？
目前普遍使用的支原体检测方法
1、支原体的分离培养
它是支原体污染鉴定的金标准，准确，价格便宜。但支原体在分离培养的过程中，要长出明显克隆至少需要4周时间，所需时间较长。
2、ELISA方法
检测步骤复杂，出现误差的几率较高，对实验者操作技巧有要求。同时试剂盒成本较高，普遍不被选用。
3、DNA荧光染色法
它采用荧光染色剂Hoechst 33258和支原体DNA富含A-T的区域结合。价格适中。由于DNA检测需要将可疑样品与指示细胞共同培养，因此一般需要几天后才出结果。有假阳性和假阴性，需要与其他方法结合使用。
4、PCR技术
它根据支原体核糖体16s-23s rRNA的特异保守序列设计引物，对待检样本DNA进行扩增，通过对扩增产物的大小分析作出诊断（见下图）。操作简单、速度快，只需2-3小时即可出结果，通量高，价格适中。
但是，不同厂家生产的PCR检测试剂盒由于引物及内在设计的不同，其准确度和敏感度有天壤之别。
目前，被全球各大实验室及生物药厂普遍选用的是德国Minerva Biolabs公司开发生产的支原体PCR检测试剂盒。试剂盒在267bp的条带，涵盖了欧洲《药典》中最易感染细胞的26种支原体亚型，保证了其超强的敏感度；通过内控条带的设计，防止了假阴性的发生。
我国农业部在2008年猪蓝耳病疫苗研制的重点项目中，实验者用此检测法与培养法做了超过100次的平行比对实验，结果全部一致，假阳性率和假阴性率为零。
因此，用PCR方法检测支原体，其准确性与选择的试剂盒的质量有直接相关性。
图：有支原体污染的样本在267bp位置有阳性条带。Internal Control为内部对照，在190bp，保证PCR反应的正常。